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2017年5月Nature及Cell发表文章—RNAscope应用举例(一)

你所不知道的RNAscope

RNAscope技术是由美国Bio-techne旗下Advanced Cell Diagnostics (ACD)公司研发的RNA原位杂交产品,在近年来的生物检测领域发展迅速。与传统的RNA原位杂交相比,RNAscope技术属于新一代RNA原位杂交技术,其特异性的双Z探针设计避免了传统长链RNA探针的弊端,配以自身级联放大检测原理,可以高效敏感地检测到目标RNA。该方法的具体优势如下:

1. 应用广泛:使用RNAscope技术,靶点RNA为大于等于300个碱基的特异序列,即可进行探针设计。因而RNAscope技术可以应用于几乎所有物种,所有组织以及所有基因的检测。

2. 特异性:RNAscope独特的双Z(ZZ) 探针设计有效的防止了探针的非特异性结合,同时降低了背景干扰。由于结合在非特异性位点的单个的Z 探针不会产生完整的信号放大分子结合位点,并会在杂交过程中被洗脱掉,从而防止非特异性信号的放大,使得探针的信号具有高度特异性。探针设计合成需要2~4周时间即可完成。

3. 灵敏度:RNAscope方法检测每个RNA 分子时,只需三对双Z(ZZ)探针即可完成杂交和信号可视化。

4. 单分子可视化和单细胞定量:使用RNAscope技术杂交上三对及以上双Z 探针即可在标准的显微镜下呈现可观察到的点状信号。ACD公司提供的分析软件更可以定量每一个单细胞内RNA 的表达水平。

5. 兼容降解的RNA:由于RNAscope三对双Z探针即可检测到目标RNA,而通常针对靶点RNA设计的探针为20 对双Z 探针,因而即使目标RNA发生部分降解,仍可以稳定有效地检测到靶点RNA。

6. 检测结果稳定一致性:由于工业化合成RNAscope技术用到的探针以及所有检测试剂,且该技术针对不同样本类型(冰冻切片, 石蜡切片,悬浮细胞,贴壁细胞等)已经有成熟的实验操作流程,故使得RNAscope技术检测结果具有稳定性和一致性。除了可以在实验室进行手工操作外,该产品也可以在Leica以及罗氏Ventana自动平台上运行,为结果的一致性和稳定性提供了可靠的依据。

7. 多通道多靶点同时检测:由于RNAscope技术可以同时进行多通道探针杂交以及信号放大,故在可见光检测中可以在同一张切片上同时检测两个靶点;而在荧光检测过程中,可以在同一张切片上检测三个或三个以上靶点RNA。


Reference:

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